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LC液相色譜儀是一類分離與分析技術(shù)

更新時(shí)間:2018-06-11      點(diǎn)擊次數(shù):3197
   LC液相色譜儀是一類分離與分析技術(shù),其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相,固定相可以有多種形式,如紙、薄板和填充床等。在色譜技術(shù)發(fā)展的過程中.為了區(qū)分各種方法,根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名,如,紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
  LC液相色譜儀的使用和維護(hù)注意事項(xiàng):
 ?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C(jī)械震動(dòng)。柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
  ②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/div>
 ?、垡话阏f來色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。
  ④選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
 ?、荼苊鈱?fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。
 ?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
 ?、弑4嫔V柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時(shí)間。
 ?、嗌V柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。
 ?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測完成后,用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
  對LC液相色譜儀的要求
  1、流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細(xì)的膜過濾)。
  2、流動(dòng)相過濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。
  3、不能用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。
  4、使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
  5、長時(shí)間不用儀器,應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機(jī)相(如,甲醇等),因?yàn)?,純水易長霉。
  6、每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
  7、C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
  8、堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
 ?、僖援惐甲魅軇_洗;
  ②放在異丙醇中間用超聲波清洗;
 ?、塾?0%稀硝酸清洗;
  9、氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn),重現(xiàn)性差,所以在使用過程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
  10、如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí),要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
  11、要注意柱子的pH值范圍,不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品,特別是堿性樣品。
  12、LC液相色譜儀更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗,然后插入新的流動(dòng)相中。更換無互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過渡一下。
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